Желимо да заједно са вама анализирамо ситуацију. Од јула 2018. године прошло је осам месеци и у овим временским периодима постигли смо изузетно задовољавајуће резултате. Представили смо истраживачки програм иу вези са анализом вакцина можемо да направимо референтну тачку, са постигнутим циљевима, онима који се финализују и онима који су планирани за сада.
За почетак, анализе 2 једињења за сваку вакцину су верификоване помоћу стандарда, користећи сертификоване контролне стандарде са концентрацијом реда величине микрограма / мЛ. Једињења која смо изабрали су међу онима који су познати по свом критичном профилу опасности. Говоримо о кумулативној количини, укупном износу оних који су признати као идентитети и онима који се могу идентификовати, а који се могу проценити унутар реда 50 микрограма / мЛ, за разлику од смерница ЕМА / ФДА.
Ови тестови су дали позитивне резултате, стога у потпуности потврђују методу анализе! Уочене контаминације вероватно су последица различитих појава и тема производног процеса. Оно што је уочено у току студија је варијација састава у “интер-шаржама”, због чега претпостављамо да постоје одређени кораци у процесу производње производа који је тешко контролисати.
Такве анализе су нам омогућиле да урадимо следеће кораке:
- Оцењивање усаглашености композиције као што је наведено у техничком листу о вакцини
- Скрининг за хемијска и протеинска/пептидна загађења, као и она која потичу од генетског материјала
Потврдно испитивање хемијских и протеинских циљних једињења путем стандардних сертификата инспекције
Следеће вакцине су подвргнуте почетном скринингу:
- Infanrix Hexa – GlaxoSmithKline Biologicals s.a.
- Priorix Tetra – GlaxoSmithKline S.p.A.
- Hexyon – Sanofi Pasteur Europe
- Gardasil 9 – MSD Vaccins
Ове друге вакцине су анализиране као почетни скрининг:
- Measles vaccine live B.P. – Poonawalla Group (Profarma AG, Baar)
- MMR vax Pro – MSD Vaccins, Francia
- PolioInfanrix – GlaxoSmithKline, Belgio
- Fluad – Seqirus Srl, Siena
- Vivotif – PaxVax, Regno Unito
Коришћена технологија
Студија је структурирана у:
Анализа нечистоћа и хемијске и протеинске контаминације
ЛЦ-САЦИ / ЕСИ-МС систем за анализу повезан са пионирском САНИСТ платформом је коришћен за обављање иницијалног идентификационог скрининга на вакцине од интереса, као и за потврђивање са контролним стандардима, са минималним нивоом између нанограма и микрограма/доза
МАЛДИ-ТОФ-МС технологија се користи за проучавање нерастворљивих макромолекула који се налазе у вакцинама
Анализа генетског материјала
Испитивање присуства нуклеинских киселина (ДНК / РНК) хуманог и животињског порекла и микроорганизама (вируса, бактерија) методом секвенцирања наредне генерације, која је омогућила квантификацију секвенце генетског материјала садржане у вакцинама у високо специфичној и прецизан начин
Верификација подударности бактерија и живих атенуираних и инактивираних вирусних геномских секвенци (присуство генетских варијанти)
Квантитативна анализа метала
- ИЦП-МС технологија је омогућила квантификацију метала присутних у вакцинама са минималном границом од 5нг / доза.
Анализа хемијске и протеинске контаминације
Након првог скрининга који је идентификовао присуство стотина хемијских сигнала унутар вакцина, потврдни тестови су спроведени помоћу стандарда од 2 једињења по вакцини, користећи сертификоване контролне стандарде, изабране од оних познатих за њихов критични профил опасности и за не-резидуална количина (као што се сматра компонентама вакцине, стога треба укључити у технички лист и квантификовати).
Ови тестови су дали позитивне резултате, тако да у потпуности потврђују методу анализе. До сада су само два једињења тестирана искључиво из економских разлога, у ствари ова студија није потпуна, јер је ограничена значајним трошковима истраживања, али смо одабрали да идентификујемо релевантније стандарде у погледу регулаторних ограничења и да сматрамо да ова врста дубинске истраге ипак не би требало да зависи од нас.
Уочене контаминације су највјероватније поседица различитих појава и тема производног процеса. Оно што смо приметили на истраживачким корацима је варијација састава између различитих група, због чега претпостављамо да постоје одређени кораци дуж целог процеса производње производа који се тешко контролишу. Узимајући у обзир уобичајене аналитичке факторе, може се претпоставити да концентрација је реда величине микрограма / мЛ. Што се тиче кумулативне количине могуће је проценити на основу полу-квантитативне процене (пошто је већина једињења непозната) да су контаминанти унутар реда величине од 50μг / мЛ. Ово је важан податак јер су ЕМА / ФДА смернице веома јасне у вези са тим. Контаминације не би требало да буду присутне (испод нивоа детекције) или ако су присутне, треба их добро идентификовати и доказати да се примјењују одговарајуће методе за њихово смањење. У овом случају загађивачи нису испод нивоа способности уређаја за детекцију (нг / мЛ), тако да сматрамо да произвођач не примењује никакве методе пречишћавања. Што се тиче присуства адвентивних вируса, проблем не постоји, јер они не смеју бити присутни уопште.
- У ПРОГРЕСУ – У току су интерлабораторијске анализе потврда ових једињења.
Једињења идентификована стандардом биће поново потврђена истом технологијом од стране различитих лабораторија. Један од наших циљева је да координирамо овај пројекат и уз подршку и сарадњу међународних удружења.
- У ПРОГРЕСУ – Студија кинетике падавина антигена везаних за алуминијум.
Метагеномска анализа
- У ПРОГРЕСУ – Анализа са додатним стандардима контроле ДНК и РНК друге серије вакцине.
Од почетка овог пројекта било нам је јасно да се анализе, да би се испунили неопходни захтеви за репликабилност и тачност података, морају извршити са најнапреднијом инструментацијом, и праћењем свих различитости унутар исте серије и између различитих серије. Како настављамо са истрагама, континуирано се анализирају и друге парцеле, очигледно у оквиру буџета и доступности производа.
- У ПРОГРЕСУ – Анализа секвенце генома феталне ДНК из МРЦ-5 ћелијске линије.
Пошто смо од првог скрининга имали могућност да стандардно потврдимо да су кориштене диплоидне линије МРЦ-5, као што је наведено у техничком листу. Жељели бисмо продубити проучавање ове ћелијске линије и због чињенице да је њено присуство изванредно по количини и димензијама.
- У ПРОГРЕСУ – Проучавање мањих варијанти (квази-врсте) вируса морбила, заушака и рубеоле.
У поређењу са првим извештајем из јула 2018. године (хттпс://бит.ли/2УЦЦ2иС) наручили смо детаљну студију о мањим варијантама, јер мутације у атенуираним вирусима нису биле једине које су пронађене. Ово питање такође изазива велике сумње у погледу ефикасности и безбедности вакцине. Овај резултат ће трајати више времена него други извештаји, јер верификацију секвенци мутаната треба извршити ручно.
- У ПРОГРЕСУ – Интерлабораторијска анализа потврде
Идентификовали смо стране и домаће лабораторије на које смо стандардизовали наручивање анализе. Овај резултат ће ускоро бити доступан.
Пројекти који се процењују
Проучавање потенције антигена вакцине: ово истраживање треба да се спроведе у центру који је акредитован од стране регулаторних агенција за предклиничку студију вакцина. Циљ је да се провери да ли су антигени вакцине способни да производе или везују специфична антитела (теоретски се претпоставља да су ова антитела заштитна, али ова анализа нам не дозвољава да докажемо да је вакцина способна да заштити од болести). Трошкови овог корака могу бити релевантни, тако да је пројекат тренутно само хипотеза.
